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平衡透析法在PPB測定中有哪些缺陷

更新時間:2021-12-09      點擊次數(shù):2785
  PPB即表示與血漿蛋白結合形成結合態(tài)藥物的比例。游離藥物假說認為僅有游離態(tài)的藥物才能擴散透過生物膜,到達靶部位發(fā)揮藥效;另外游離藥物的比例還顯著影響藥物分布、代謝和排泄的過程,PPB與藥物的諸多藥理性質均有關。
  影響PPB測定的因素很多,如溶解度、溫度、非特異性結合、酯酶代謝等,需根據(jù)化合物的特征,結合研究的實際目的,選擇合適的測定方法反應真實的化合物特性。需根據(jù)化合物預期治療濃度,個性化的制定試驗濃度,必要時進行不同濃度條件下的PPB測定。其中對于*蛋白結合率的化合物,試驗的微小偏差即會對結果造成較大的相對偏差,此時還需要同步優(yōu)化精密度更高的LC-MS/MS、放射性等檢測分析技術。
  平衡透析法目前是常用的方法,但也存在一定的缺陷,如初始平衡狀態(tài)的改變、非特異性結合、體積變換、Donnan效應和蛋白滲漏等。
  初始平衡狀態(tài)的改變是指當游離藥物穿過半透膜時會形成新的游離態(tài)-結合態(tài)的平衡,由此造成試驗設置濃度與實際平衡濃度的差異,對于PPB存在濃度依賴特性的化合物可能造成結果的偏差。
  非特異性結合是指藥物與半滲透膜等試驗裝置的結合,可能造成游離藥物濃度的低估,進而影響試驗結果。通常采用聚四氟乙烯(Teflon)制造的試驗裝置以降低非特異性結合的影響。如果非特異性結合現(xiàn)象比較嚴重建議采用超速離心法。
  體積轉換是指液體在膠體滲透壓的作用下從buffer側移動至蛋白側,由此稀釋蛋白濃度對結合率較低的化合物試驗結果造成影響。當液體轉換比例低于10%時該效應幾乎忽略,孵育時間超過4h可能會加劇該效應,可以通過在buffer側加入右旋糖酐以平衡兩側滲透壓。
  Donnan效應是指吉布斯-唐南效應,是指帶電粒子不通過半透膜而產(chǎn)生不均勻的電荷,使兩側粒子濃度不一致。尤其對于高離子化且低蛋白結合的藥物,該效應最為明顯,該效應可以通過增加buffer側電解質的濃度來弱化。
  當半透膜完整性出現(xiàn)問題時會發(fā)生蛋白滲漏現(xiàn)象,對于高蛋白結合率化合物,由此會造成游離藥物比例的顯著高估,尤其在孵育時間過長時易發(fā)生。
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