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IPHASE/匯智和源 轉運體在藥物研發(fā)中的應用疑難問題解答

更新時間:2022-12-23      點擊次數:1903

轉運體在藥物研發(fā)中的應用

—熱點問題—


第一題    25%是怎么計算的?


答:具體詳見國家藥監(jiān)局藥品審評中心頒布的【藥物相互作用研究技術指導原則】


膽汁清除率=膽汁排泄速度/血漿藥物濃度

                =膽汁流量*膽汁藥物濃度/血漿藥物濃度


第二題    ABC囊泡試驗AMP組底物攝入比ATP組高?


答:出現這種情況需要考慮以下幾種可能因素:

1、評估在研藥物是否高滲透性藥物;

2、藥物與囊泡的孵育時間可能過短,需優(yōu)化藥物與囊泡的孵育時間;

3、由于底物與囊泡反應終止后底物有可能從囊泡腔內流回緩沖液,囊泡懸液轉移到過濾裝置必須迅速,并且必須遵循一致的時間軸。


第三題    針對口服多肽(分子量1 K左右)需要考察轉運體的作用嗎?


答:國家藥監(jiān)局藥品審評中心頒布的【藥物相互作用研究技術指導原則】對口服多肽是否需要考察轉運體介導的藥物相互作用沒有明確要求,建議可進行探索性的研究。


第四題    在運用SLC轉運體細胞的時候,最高濃度藥物的攝取率比次高濃度藥物的攝取率突然增加幾十倍,是什么原因?


答:

1、各組間攝取率的比較是基于細胞總蛋白或細胞數量進行攝取率的歸一化,因此必須保證每組總蛋白量的測定準確,建議每組裂解完細胞后鏡下觀察所有細胞是否裂解充分;

2、高濃度藥物是否存在對細胞的毒性作用,造成大量細胞死亡。

3、藥物與SLC轉運體細胞孵育時間需要進行優(yōu)化,建議檢測不同孵育時間底物吸收情況繪制時間依賴曲線,以確定線性吸收的時間范圍。


第五題    SLC轉運體細胞在藥物作用前去掉培養(yǎng)液后,是否需要用反應緩沖液預孵育幾分鐘?


答:建議用不含底物的反應緩沖液37℃預孵育5分鐘。


第六題    SLC轉運體細胞藥物作用終止后,用乙腈、甲醇等有機溶劑或反復凍融方法都可以裂解細胞嗎?


答:高濃度(如80%乙腈)有機溶劑和反復凍融方法都可導致細胞破裂,釋放出細胞內蛋白和攝入的底物,但有機溶劑是否影響后續(xù)底物的檢測,需要根據不同檢測方法的要求有不同的考量。


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